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異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 |
| CAS No.: |
367-93-1 |
| 分子式： |
C9H18O5S |
| 分子量： |
238.3 |
| 備注： |
中文名稱異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷中文同義詞ISOPROPYL尾-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE;異丙基-Β-D-硫代半乳糖苷/異丙基-Β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷/1-甲基乙基-Β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷;異丙基-B-D-硫代半乳糖苷1G;甲基-BETA-D-半乳糖苷;IPTG異丙基-Β-D-硫代半乳糖苷;異丙基Β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷IPTG;異丙基硫代-Β-D-半乳糖苷(IPTG);異丙基-Β-D-硫代半乳糖苷(簡(jiǎn)稱IPTG)英文名稱IPTG英文同義詞POLYETYLENEGLYCOL6000MOL.BIOLOGYGRA;SULPHURICACID0,01MOL/L0,02N;YPDBROTHE;Isopropyl2,3-O-isopropylidene-4-O-benzoyl-β-L-thiorhamnopyranoside;IPTG(Isopropyl-β-D-thiogalatopyranoside);1-ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE;isopropyl-thiogalactopyranoside;1-methylethyl1-thio-.beta.-D-GalactopyranosideCAS號(hào)367-93-1分子式C9H18O5S分子量238.3EINECS號(hào)206-703-0相關(guān)類別微生物;定制合成產(chǎn)品;原料藥;化學(xué)原藥;糖類;醫(yī)藥原料;原料;生物化工;基因工程蛋白生產(chǎn)誘導(dǎo)劑;基因組學(xué)和分子診斷;生物化學(xué);蛋白質(zhì)組學(xué);安慰性誘導(dǎo)物;誘導(dǎo)劑;糖苷系列;常用試劑;其它生化試劑;試劑;MBI產(chǎn)品;自主產(chǎn)品;化妝品原料;基因工程菌誘導(dǎo)劑;優(yōu)勢(shì)產(chǎn)品;化學(xué)試劑;特色原料;中間體;有機(jī)原料;輔酶;生化試劑-碳水化合物類;其他化工產(chǎn)品;化工中間體;植物提取物;常用糖合成中間體;分子生物學(xué)-即用型溶液;分子生物試劑-核酸相關(guān);化工產(chǎn)品-有機(jī)化工;其他原料;醫(yī)藥原料藥-科研原料;黃金產(chǎn)品;糖類（碳水化合物）;Intermediates中間體;檢測(cè)，顯色，標(biāo)記試劑;Substrates;13C&2HSugars;Biochemistry;Galactose;Glycosides;Sugars;Thioglycosides;Enzymesubstrates;Carbohydrates&Derivatives;Carbohydrates;單糖;檢測(cè)標(biāo)志試劑;生化試劑;酶底物;糖類化合物;醫(yī)藥中間體;substrate;其他生化試劑;Imidazolines/Imidazolidines,Imidazoles,HeterocyclicAcids;糖類化合物/單糖;食品添加劑;碳水化合物類;碳水化合物;標(biāo)準(zhǔn)品-標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液;生化試劑-蛋白質(zhì);試劑類;化學(xué)試劑;化工原料;自有品牌試劑;精細(xì)化工原料;其它;保健品原料;醫(yī)藥化工類;檢測(cè)標(biāo)記顯色;通用生化試劑-糖類;科研試劑;生物緩沖劑;其他;化工中間體Mol文件367-93-1.mol結(jié)構(gòu)式異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷性質(zhì)熔點(diǎn)105°C比旋光度-31o(c=1,water)沸點(diǎn)350.9°C(roughestimate)密度1.3329(roughestimate)折射率1.5060(estimate)儲(chǔ)存條件2-8°C溶解度溶于水或甲醇。酸度系數(shù)(pKa)13.00±0.70(Predicted)形態(tài)結(jié)晶粉末顏色白色水溶解性solubleMerck14,5082BRN4631穩(wěn)定性穩(wěn)定的。與強(qiáng)氧化劑不相容。InChIKeyBPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-NCAS數(shù)據(jù)庫367-93-1(CASDataBaseReference)EPA化學(xué)物質(zhì)信息Isopropyl.beta.-thiogalactoside(367-93-1)異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷用途與合成方法概述異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG常用于需要誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與X-Gal或Bluo-Gal結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo)lac操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG與lacI阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止β-半乳糖苷酶編碼基因lacZ的抑制。誘導(dǎo)原理E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解（代謝）物基因激活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個(gè)酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達(dá)。在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時(shí)，I序列在PI啟動(dòng)序列操縱下表達(dá)的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄起動(dòng)。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）即可被Chemicalbook誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘恰：笳咦鳛橐环N誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG的優(yōu)點(diǎn)1.能誘導(dǎo)酶的合成，但又不被分解的分子，稱為安慰誘導(dǎo)物。由于乳糖雖可誘導(dǎo)酶的合成，但又隨之分解，產(chǎn)生很多復(fù)雜的動(dòng)力學(xué)問題，因此人們常用安慰誘導(dǎo)物來進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)。2.IPTG不被菌體代謝，為乳糖類似物，一旦進(jìn)入細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生持續(xù)長(zhǎng)久的誘導(dǎo)效果，所以IPTG的誘導(dǎo)效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可達(dá)到理想誘導(dǎo)效果。由于IPTG不被代謝，在胞內(nèi)專一誘導(dǎo)外源蛋白的表達(dá)。不受細(xì)胞代謝的影響，誘導(dǎo)效果持續(xù)穩(wěn)定。乳糖有雙效作用，既能做為誘導(dǎo)劑異乳糖的前體物質(zhì)，又可以做碳源，在誘導(dǎo)過程中，很不穩(wěn)定，IPTG因其優(yōu)異的穩(wěn)定性決定了它適合做實(shí)驗(yàn)研究用。3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點(diǎn)的親和力相同，IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識(shí)別，但它是lac基因簇十分有效的誘導(dǎo)物。使用方法：首先把IPTG配制成23.83mg/ml(100mM)的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)dna片段插入至pUC系列載體(或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體)，然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備1、誘導(dǎo)表達(dá)材料：(1)LB(Luria—Bertani))培養(yǎng)基：酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl10g瓊脂(Agar)1-2%蒸餾水(Distilledwater)1000mlpH7.0適用范圍：大腸桿菌(2)IPTG貯備液：2gIPTG溶于10mL蒸餾水中,0.22μm濾膜過濾除菌,分裝成1mL/份,-20℃保存.(3)l×凝膠電泳加樣緩沖液：50mmol/LTris-CI(pH6.8)50mmol/LDTT2%SDS(電泳級(jí))0.1%溴酚藍(lán)10%甘油2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白純化材料：1)酶溶法(1)裂解緩沖液：50mmol/LTris-CI(pH8.0)1mmol/LEDTA100mmol/LNaCI(2)50mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF).(3)10mg/mL溶菌酶.(4)脫氧膽酸.(5)1mg/mLDNaseI.2)超聲破碎法(1)TE緩沖液.(2)2×SDS-PAGE凝膠電泳加樣緩沖液：100mmol/LTris-HCI(pH8.0)100mmol/LDTT4%SDS0.2%溴酚藍(lán)20%甘油實(shí)驗(yàn)方案1、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)：(1)用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA和目的基因.(2)按連接步驟連接目的基因和載體,并轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的宿主菌.(3)篩選出含重組子的轉(zhuǎn)化菌落,提取質(zhì)粒DNA作限制性內(nèi)切核酸酶圖譜,DNA序列測(cè)定,確定無誤后進(jìn)行下一步.(4)如果表達(dá)載體的原核啟動(dòng)子為PL啟動(dòng)子,則在30-32℃培養(yǎng)數(shù)小時(shí),使培養(yǎng)液的OD600達(dá)0.4-0.6,迅速使溫度升至42℃繼續(xù)培養(yǎng)3-5h;如果表達(dá)載體的原核啟動(dòng)子為tac等,則37℃培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)小時(shí)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后加IPTG至終濃度為1mmol/L.繼續(xù)培養(yǎng)3-5h.(5)取上述培養(yǎng)液1mL,1000g離心,1min,沉淀,加100μL聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后,作SDS-PAGE檢測(cè).2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質(zhì)純化：細(xì)菌的裂解常用方法有：①高溫珠磨法;②高壓勻漿;③超聲破碎法;④酶溶法;⑤化學(xué)滲透等.前三種方法屬機(jī)械破碎法,并且方法①、②已在工業(yè)生產(chǎn)中得到應(yīng)用,后三種方法在實(shí)驗(yàn)室研究中應(yīng)用較為廣泛.下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實(shí)驗(yàn)步驟.酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3-葡聚糖酶;β-1,6-葡聚糖酶;蛋白酶;殼多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要對(duì)細(xì)菌類有作用,而其他幾種酶對(duì)酵母作用顯著.主要步驟為：4℃,5000rpm離心,15min,收集誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)液(100mL).棄上清,約每克濕菌加3mL裂解緩沖液,懸浮沉淀.用途常用分子生物學(xué)試劑，常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等用途是β-半乳糖苷酶和β-半乳糖透酶的誘導(dǎo)劑，不被β-半乳糖苷水解，是硫代半乳糖轉(zhuǎn)酰酶的底物用途IPTG常用于需要誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與X-Gal或Bluo-Gal結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo)lac操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG與lacI阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止β-半乳糖苷酶編碼基因lacZ的抑制。 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聯(lián)系人： |
金經(jīng)理 |
地 址： |
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